1. 纯化产物可以如何保存？

答：纯化产物由于浓度较低容易降解，去除Globin mRNA 和rRNA的样品应尽快进行下游实验，否则 于-80 ~ -65 ℃保存。

2. 如果纯化产物用于文库构建，但是使用的是Nuclease-free ddH₂O洗脱，如何操作?

答：使用VAHTS Universal V8 RNA-seq Library Prep Kit for Illunima (Vazyme #NR605)时，若条件允许，加入等体积的VAHTS 2 × Frag/Prime Buffer (Vazyme #N402 )，之后反应体系均放大，直至做到纯化步骤，恢复体系；也可以再次使用VAHTS RNA Clean Beads (Vazyme #N412)进行纯化，最后用Frag/Prime Buffer洗脱。

3. 如果起始文库浓度过低，可以从哪些角度去寻找原因并如何改进?

答：Globin mRNA & rRNA去除后RNA的产量取决于起始RNA的质量、样品中rRNA的含量和使用的纯化方法。以高质量的RNA样品为模板构建得到的文库浓度均能达到上机测序要求，如果无法提取合格的RNA样品，可以尝试使用以下方法弥补：①起始量：提高样品起始量，上限1 μg；②做几个重复的样品，到纯化步骤后合并在一起；③做不分选方案：94℃ 8 min打断条件下RNA片段虽然偏小，但是分布会集中，均一性也较好。