产品说明书 | |
---|---|
产品单页 | |
相关文献 | |
MSDS/SDS | |
COA | |
技术文章 |
|
Q1:如何选择采用一步法还是两步法进行RT-PCR?
A1:一步法即逆转录和PCR扩增在同一管内进行,不需要额外的开管/移液操作,大大提高了检测通量,并降低了污染的风险。由于得到的所有cDNA样品都用来扩增,所以灵敏度更高,最低可以达到0.01 pg总RNA。一步法使用基因特异性引物起始cDNA合成,所以投入什么引物就逆转出相应的cDNA产物,得不到中间产物cDNA。更适用于特定基因的检测、较少的组织样本、具有大量模板待检测等情况。
两步法即逆转录和PCR扩增分两步进行,首先从RNA模板逆转录得到cDNA,得到的cDNA再进行一次或多次不同的PCR反应。两步法可以使用通用型逆转录(oligo dT或随机引物)引导cDNA第一链合成,可以逆转出所有mRNA的信息。后续实验可以方便进行多个基因的检测。