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Q1：如何选择采用一步法还是两步法进行RT-PCR?
A1：一步法即逆转录和PCR扩增在同一管内进行，不需要额外的开管/移液操作，大大提高了检测通量，并降低了污染的风险。由于得到的所有cDNA样品都用来扩增，所以灵敏度更高，最低可以达到0.01 pg总RNA。一步法使用基因特异性引物起始cDNA合成，所以投入什么引物就逆转出相应的cDNA产物，得不到中间产物cDNA。更适用于特定基因的检测、较少的组织样本、具有大量模板待检测等情况。
两步法即逆转录和PCR扩增分两步进行，首先从RNA模板逆转录得到cDNA，得到的cDNA再进行一次或多次不同的PCR反应。两步法可以使用通用型逆转录(oligo dT或随机引物)引导cDNA第一链合成，可以逆转出所有mRNA的信息。后续实验可以方便进行多个基因的检测。
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